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技術服務

蛋白生物學技術服務-Western blot實驗

技術原理與實驗步驟

免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質印跡(western blot),它是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法,具有高分辨力、高特異性和敏感性,是蛋白分析的一種常規技術,可常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進行定性和半定量分析。蛋白經過PAGE凝膠電泳及轉膜后,添加一抗可與蛋白特異結合,加入標有辣根過氧化物酶的二抗可與一抗結合,最后通過與加有底物的顯色液反應,通過化學發光或膠片顯色達到檢測蛋白的目的。

服務流程

  1. 客戶提供樣品;
  2. 提取樣品蛋白,測定蛋白濃度,確定上樣量;
  3. 蛋白進行SDS-PAGE凝膠電泳;
  4. 蛋白質轉膜;
  5. 轉膜后用脫脂奶粉封閉,一抗孵育后洗滌并進行二抗孵育;
  6. 二抗孵育好后洗滌,化學發光法或膠片顯色;
  7. 發送結果:蛋白樣品及測定濃度、上樣量等信息,抗體信息,顯色結果及分析。