技術(shù)原理與實(shí)驗(yàn)步驟

蛋白免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)是一種研究蛋白質(zhì)間交互作用的生物技術(shù)，這種技術(shù)是將蛋白質(zhì)視為抗原，加入相對(duì)應(yīng)的抗體與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后，再與蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶聯(lián)的agarose或Sepharose珠子孵育，通過(guò)離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復(fù)合物，從而達(dá)到分離和濃縮出特定蛋白質(zhì)的目的。

蛋白免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來(lái)。當(dāng)用預(yù)先固化在argarose beads上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來(lái)。再通過(guò)蛋白變性分離，對(duì)B蛋白進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)而證明兩者間的相互作用。這種方法得到的目的蛋白是在細(xì)胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的，符合體內(nèi)實(shí)際情況，得到的結(jié)果可信度高。

服務(wù)流程

1. 客戶提供血液、細(xì)胞、組織等樣品
2. 樣品裂解，離心后收集上清
3. 加入目的蛋白A抗體，孵育與目的蛋白A結(jié)合
4. 加入連接有proteinA或G的瓊脂糖凝膠珠，孵育與抗體結(jié)合
5. 離心，棄掉上清，沉底進(jìn)行SDS-PAGE驗(yàn)證
6. 提交結(jié)果：抗體沉淀蛋白、蛋白SDS-PAGE及western blot驗(yàn)證圖